细胞传代的实验步骤是什么？有何注意事项？

2023-09-12 在细胞培养过程中，去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的培养基中，维持细胞的活力与增殖。细胞传代既可以扩大细胞培养量，也能够避免细胞因进入平台期而出现生长抑制甚至死亡的情况。那么你知道细胞传代的实验步骤是什么吗？有何注意事项呢？让我们一起来看看吧！一、实验步骤1.贴壁细胞的传代:1)倒置显微镜下观察细胞形态及密度，评估细胞的状态，以作为传代比例的参考。2)提前紫外杀菌（至少30min为宜）操作台及实验材料。3)注意无菌操作，在操作台中吸除或倒掉培养皿内旧培养液（尽可能去...

如何选择蛋白表达系统？

2023-09-11 在蛋白表达系统的相关研究中，从头合成蛋白质并不是一个可行的选择。因此需要借助活细胞或细胞器用作生产和构建蛋白质的工厂。那么你知道该如何选择蛋白表达系统吗？让我们一起来看看吧！目前，较为主流的表达宿主有大肠杆菌（E.coli）、毕赤酵母（P.pastoris）、昆虫-杆状病毒（Bac-to-Bac系统）以及哺乳动物细胞系（CHO、HEK293）等。一、细菌优点：1.遗传背景清楚；2.繁殖快、成本低、抗污染能力强；3.表达量高、表达产物分离纯化相对简单、稳定性好；4.商品化的载体...

你知道胎牛血清的用途和应用领域吗？

2023-09-11 胎牛血清是从胎牛脐带血中提取的一种生物制品。它是一种黄褐色液体，主要由蛋白质、氨基酸、碳水化合物、脂类、矿物质和生长因子等组成。那么你知道胎牛血清的用途和应用领域吗？让我们一起来看看吧！一、细胞和组织培养：胎牛血清是常用的培养基补充物之一，提供细胞生长所需的营养物质、生长因子和调节因子。它能够维持细胞的适宜环境，促进细胞的增殖和分化，并提高细胞产量和特定细胞类型的功能。二、疫苗和生物制品生产：胎牛血清在疫苗、抗体和生物药物的生产过程中起着重要的作用。它可以作为培养基的补充物，...

哪些因素影响电转效率？

2023-09-08 电转，也称电穿孔法，是通过脉冲电流在细胞膜上打孔，将外源分子（DNA、RNA、mRNA等）导入真核细胞内，来改变细胞的特性，从而达到改造细胞的目的，是实现细胞基因功能和蛋白质表达研究的重要工具。那么影响电转效率的因素有哪些呢？让我们一起来看看吧！一、电转过程1）电转的完整操作步骤包括电转前操作，电转执行和电转后培养。在进行电转前操作时，电转试剂、细胞与转染底物要进行混匀，如果混匀时过于激烈，会破坏转染复合物的形成，从而导致转染效率降低；2）在进行电转前操作时，电击缓冲液的选择...

超速离心机分为哪几类？主要应用于什么？

2023-09-08 超速离心机是一种精密和*的离心机，它以极gao的速度运行并分离出传统离心机无法分离的较小分子。那么超速离心机分为哪几类呢？主要应用于什么呢？让我们一起来看看吧！一、分析型超速离心机（AUC）顾名思义，分析离心机是用于分析样品中存在的各种颗粒的超速离心机。分析超速离心(AUC)是一种用于定量分析溶液中大分子的通用且稳健的方法这些超速离心机具有检测系统，可实时监测颗粒的旋转和位置，以确定沉降系数，这有助于根据形状、大小和质量分析颗粒。用于测定大分子的相对分子质量的分析超速离心可以...

蛋白质纯化有哪些步骤呢？

2023-09-06 蛋白质纯化是利用基因工程技术将编码蛋白质的核酸序列导入宿主细胞，使其大量表达，然后采用合适的纯化方法进行体外纯化，以获得高纯度、高活性和高产量的蛋白质的过程。那么你知道蛋白质纯化操作步骤吗？让我们一起来看看吧！1、构建原核表达质粒：目的基因PCR，载体酶切，连接，转化，挑单克隆送测序；2、将构建成功的质粒转化到BL21（DE3）中，37℃培养过夜，挑单克隆小摇过夜；3、小诱导摸索最佳诱导条件：将摇过夜的菌液1:1000接种到3mLLB中，37℃摇4-5h至菌液OD600=0....

如何区分非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker？

2023-09-06 蛋白Marker是蛋白分子量标准，是一些已知分子量的蛋白质的混合物，像“尺子”一样用来指示蛋白质条带的大小。那么如何区分非预染蛋白Marker和预染蛋白Marker呢？让我们一起来看看吧！非预染蛋白Marker：是几种已知分子量并纯化好的蛋白质预混液，方便不同大小的蛋白比较。非预染的Marker使用上不如预染Marker好用，因为电泳过程中完quan看不到，电泳结束后经过蛋白染色后才能起指示作用，无法在实验过程中起预示参照作用，属于“后知后觉”型的。但是由于蛋白没有附带染料分...

你知道如何正确使用移液枪吗？

2023-09-04 移液枪是实验室必*好工具，是检验人的好朋友，配质控、加样都离不开移液枪的帮助，那么你知道怎么才能正确的使用移液枪吗？让我们一起来看看吧一、装吸头移液器套柄用力下压，需要时小幅度旋转即可。错误操作：用力敲击吸头。此方法会带来吸头损坏甚至移液器套柄磨损，从而影响其密封性。不可以把枪头提起来，再往下用力怼枪头盒，这个非常错误二、吸头浸入角度吸液时尽量保持垂直状态，倾斜角度不能超过20°三、吸液速度匀速连贯吸液，控制好吸液速度，太快会造成喷液，液体或者气雾冲入移液器内部，污染活塞等部...